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二手蛋白纯化系统使用中的常见问题总结

发布时间:2022-11-02浏览:19次

  二手蛋白纯化系统可用于微克到克级水平的蛋白、多肽和核酸等生物分子的快速纯化。该系统采用模块化设计、配套只能话软件并结合各类层析柱,可满足实验室各类生物大分子的纯化需求。拥有简单方便的方法编辑模块,同时数据处理模块功能强大,内置方法序列功能,可快速对曲线进行积分、批处理对比,评估柱效及方法。
 

二手蛋白纯化系统

 


 
  二手蛋白纯化系统使用中的常见问题总结:
 
  1.纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析,之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。
 
  既然是疏水性很强加点甘油或者乙二醇降低极性,这样溶解就会好得多,此外也直接加2%的PEG这样也降低极性,同时保护蛋白,再做纯化就可以了,有些蛋白是用10%的乙醇加3-5%的PEG-5000,这样的情况下蛋白还是活性回收率很高,我觉得那些表面活性剂能不用还是不用的好,失去活性可以监测一下提取,纯化,酶切到底哪里失去了活性,这样更容易解决问题。
 
  2.蛋白17kd左右,能跟肝素亲和,一般用离子交换和亲和层析纯化,用聚乙二醇修饰它,分子量增加5000左右,修饰率不可能达到100%,请问修饰后能用什么纯化方法可以把修饰的和未经修饰的分开?(当然修饰后还残留有聚乙二醇,这个小分子也要除掉)
 
  修饰度越高那么出峰也越后,因此你的蛋白选择sephadexG50试试,它的范围在1000-30000,应该是不错的选择。此外PEG是个疏水性的链,修饰后的蛋白疏水性增强,修饰度越高,疏水性越强,可以用这个原理分离。离子交换也可以选择,因为同样道理,修饰度越高,电荷被屏蔽也越多,电荷也越少,因此应该修饰度越高越先出,亲和也离子交换一样的道理。

 

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