二手蛋白纯化系统使用中的常见问题总结

　　二手蛋白纯化系统可用于微克到克级水平的蛋白、多肽和核酸等生物分子的快速纯化。该系统采用模块化设计、配套只能话软件并结合各类层析柱，可满足实验室各类生物大分子的纯化需求。拥有简单方便的方法编辑模块，同时数据处理模块功能强大，内置方法序列功能，可快速对曲线进行积分、批处理对比，评估柱效及方法。
 

 

　　二手蛋白纯化系统使用中的常见问题总结：
 

　　1.纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。
 

　　既然是疏水性很强加点甘油或者乙二醇降低极性，这样溶解就会好得多，此外也直接加2%的PEG这样也降低极性，同时保护蛋白，再做纯化就可以了，有些蛋白是用10%的乙醇加3-5%的PEG-5000，这样的情况下蛋白还是活性回收率很高，我觉得那些表面活性剂能不用还是不用的好，失去活性可以监测一下提取，纯化，酶切到底哪里失去了活性，这样更容易解决问题。
 

　　2.蛋白17kd左右，能跟肝素亲和，一般用离子交换和亲和层析纯化，用聚乙二醇修饰它，分子量增加5000左右，修饰率不可能达到100%，请问修饰后能用什么纯化方法可以把修饰的和未经修饰的分开?(当然修饰后还残留有聚乙二醇，这个小分子也要除掉)
 

　　修饰度越高那么出峰也越后，因此你的蛋白选择sephadexG50试试，它的范围在1000-30000，应该是不错的选择。此外PEG是个疏水性的链，修饰后的蛋白疏水性增强，修饰度越高，疏水性越强，可以用这个原理分离。离子交换也可以选择，因为同样道理，修饰度越高，电荷被屏蔽也越多，电荷也越少，因此应该修饰度越高越先出，亲和也离子交换一样的道理。